Caractérisation de Listeria monocytogenes par sérotypage moléculaire

La filière porcine a besoin d’une base de données de souches bactériennes pathogènes finement caractérisées, en particulier pour Listeria monocytogenes et Salmonella enterica. Pour ces deux pathogènes, l’Ifip possède déjà une collection de souches issues de la filière. Cependant une grande partie de ces souches n’est à l’heure actuelle que partiellement caractérisée (pulsotypage), le sérotypage classique par agglutination étant réalisé à l’Afssa ou au Centre National de Référence des Listeria (CNR) de l’Institut Pasteur de Paris, seuls organismes possédant les compétences nécessaires à sa réalisation. Le sérotypage est la technique utilisée en première intention pour la caractérisation des souches de L. monocytogenes réceptionnées en laboratoire. En effet, celle-ci permet un premier groupement des souches. Il existe 13 sérotype au sein de l’espèce Listeria monocytogenes dont 4 sérotypes majeurs, 1/2a, 1/2b, 1/2c et 4b. Ceux-ci ont été identifiés pour 95 % des souches reçues au CNR Listeria de l’Institut Pasteur ces cinq dernières années. Les souches de sérotype 1/2a sont fréquemment identifiées sur aliment alors que les souches de sérotype 4b sont responsables de la majorité des épidémies à forme invasive. Le sérotypage utilisant les méthodes traditionnelles d’agglutination employées jusqu’à très récemment dans les centres de référence des Listeria en Europe requiert à la fois une gestion contraignante des sérums et un opérateur expérimenté pour le réaliser. Le CNR a développé en 2004 une technique de sérotypage moléculaire par PCR multiplex permettant de séparer les quatre sérotypes majeurs de Listeria monocytogenes en quatre groupes distincts. Ce groupement est basé sur la présence de gènes spécifiques pour chaque groupe. Cette technique plus accessible remplace désormais la technique d’agglutination classique au CNR et devient la technique de référence en Europe. Elle devient par ailleurs facilement transférable. 40 souches de sérotype connu ont été testées et correctement identifiées par la méthode moléculaire. La méthode a alors été appliquée à 60 souches de L. monocytogenes issues de la base de données de l’Ifip et leurs sérogroupes ont été identifiés. L’acquisition de cette technique en interne a permis de caractériser plus finement les souches de L. monocytogenes issues de la filière porcine et présentes dans la base de données pathogènes de l’Ifip. A l’avenir, elle sera utilisée pour déterminer le sérogroupe de souches de Listeria monocytogenes d’intérêt collectées par l’Ifip.